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          脂類分子(lipids)薄層色譜(TLC)檢測(Rhodamin B)試劑盒產品說明書

          更新時間:2024-01-26  |  點擊率:289

          脂類分子(lipids)薄層色譜(TLC)檢測(Rhodamin B)試劑盒產品說明書

           

          主要用途

           

            脂類分子(lipids)薄層色譜(TLC)檢測(Rhodamin B)試劑是一種旨在使用通過薄層硅膠基質材料上,使用特定的有機溶劑,使脂類分子移動而呈現分離狀態,進而在羅丹明B的染色下,特異性地使脂類分子顯示熒光,以分析樣品中脂類分子狀況的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種人體和動物細胞和組織、植物組織,包括葉片(leaf)、谷粒(grain)、種子(seed)等樣本脂類分子的色譜分析。產品即到即用,操作簡捷,性能穩定,熒光清晰。

           

          技術背景

           

          脂類物質(LIPIDS)是一類脂溶性(疏水性)的自然分子,分為簡單脂質包括脂肪酸(FATTY ACID)及其衍生物甘油一脂、二脂、三脂;復合脂質包括磷脂、糖脂、硫脂以及脂蛋白;和中性脂質包括甘油、固醇類(STEROL)物質,例如膽固醇。脂類物質在機體中具有能量儲存的作用,是膜結構的組成成分和細胞信號分子。細胞漿脂滴(lipid droplet)的形成是正常細胞生理過程。脂滴由中性脂質構成,通常為甘油三酯,作為脂肪酸能量儲備;或膽固醇酯cholesteryl ester),作為過多細胞膽固醇的存儲。薄層色譜(thin layer chromatography;TLC是一種化合物和生物分子分離、識別、定量分析的常用方法,其分離鮮明、高度敏感、快速便捷、重復性好。通過薄層附著材料上,使用特定的有機溶劑,化合物分子移動而呈現分離狀態。脂類分子通常采用吸附(adsorption)機制進行分離,為三種常用機制:吸附、間隔、逆向等之一。   

           

          產品內容

           

            清理液(Reagent A            毫升

            萃取液(Reagent B            毫升

            穩定液(Reagent C            微升

            層析液(Reagent D                毫升

            熒光液(Reagent E            毫升

            層析板              

          產品說明書               1

           

          保存方式

           

          保存  穩定液(Reagent C)和  熒光液(Reagent E在-20冰箱里,避免光照;其余的保存在4冰箱里;  萃取液(Reagent B)和  層析液(Reagent D)容易揮發,須密閉瓶蓋;有效保證6

           

          用戶自備

           

          2毫升離心管:用于樣品操作的容器

          DOUNCE勻漿器:用于裂解細胞或組織

          4微型臺式離心機:用于樣品操作

          玻璃器皿(或100毫升燒杯):用于薄層層析

          加熱攪拌儀或烘箱:用于層析板干燥

          長紫外或熒光成像儀:用于染色后觀察分析

           

          實驗步驟

           

          一、樣品準備

           

          1. 準備好107細胞或200毫克組織等待測樣品

          2. 加入xx毫升  清理液(Reagent A

          3. 即刻放入預冷的DOUNCE勻漿器

          4. 在冰槽里用勻漿棒勻化細胞或組織(約2040下)

          5. 將所有勻漿物移入2毫升離心管

          6. 放進4微型臺式離心機離心10分鐘,速度為1500g

          7. 小心移出200微升上清液到另一個新的2毫升離心管

          8. 加入xx毫升  萃取液(Reagent B

          9. 渦旋震蕩10

          10. 放進4微型臺式離心機離心5分鐘,速度為5000g

          11. 小心移出1毫升上層液相到另一個新的2毫升離心管

          12. 加入xx微升  穩定液(Reagent C,混勻

          13. 置于冰槽里備用(注意:可以容許揮發,濃縮樣品)

           

          、薄層色譜層析

           

          1. 準備一個玻璃器皿:參考尺寸為 5厘米(長) X5厘米(寬)X 8厘米(高)或100毫升燒杯

          2. 倒入xx毫升  層析液(Reagent D(注意:液面處于底部之上1厘米)

          3. 蓋緊玻璃器皿蓋子備用

          4. 取出一塊  層析板

          5. 置于加熱攪拌儀的加熱板上孵育3分鐘

          6. 室溫下冷卻

          7. 分別加上12微升(0.2厘米直徑)上述制備的樣品在層析板上一端,距離底邊1厘米以上(注意:可以并排加上45個樣品)

          8. 放進上述準備好的玻璃器皿里(注意:點樣端朝下;  層析液(Reagent D液面不能觸及點樣的樣品)

          9. 蓋緊玻璃器皿蓋子

          10. 觀察層析液在層析板上向上移動現象(10分鐘左右),直至上沿距離層析板頂端0.5厘米處

          11. 小心取出層析板

          12. 置于加熱攪拌儀的加熱板上孵育3分鐘,或直至層析液印跡消失

          13. 室溫下冷卻

          14. xx毫升  熒光液(Reagent E倒入10cm玻璃培養皿里

          15. 將層析板面朝下放進培養皿里浸泡數秒

          16. 即刻置于暗室里晾干或置于加熱攪拌儀的加熱板上孵育30秒至1分鐘(注意:肉眼可見發白的斑點)

          17. 即刻放到長紫外成像儀(365nm)或熒光成像儀(激發/散發波長550/590nm)成像:

          脂類分子陽性呈現黃色或紫藍色斑點,背景為粉紅色

          18. 計算Rf

           

          【樣品移動后斑點中心位置(厘米)—樣品起始斑點中心位置(厘米)】÷【層析液移動后的終端位置(厘米)—層析液起始位置(厘米)】

           

          注意事項

           

          1. 本產品為10次(3050個樣品)操作

          2. 操作時,須戴手套

          3. 所有操作通風柜里進行

          4.   萃取液(Reagent B  層析液(Reagent D容易揮發,須密閉瓶蓋

          5. 用戶可以使用甘油三酯(triglycerides)、脂肪酸(fatty acids)、甘油二酯(diglycerides)、類固醇(steroids)、甘油一酯(monoglycerides) 等作為脂類分子標準品

          6. 用戶需要檢測糖脂或磷脂。例如甾醇糖甙sterol glycosides)、磷脂酸phosphatidic acid)、單半乳糖甘油二酯monogalactosyl glycerides)、磷脂酰乙醇胺phosphatidyl ethanolamine)、磷脂酰甘油phosphatidylglycerol)、二半乳糖二甘油酯digalactosyl glycerides)、腦硫脂sulfolipid)、卵磷脂phosphatidyl choline)、溶血磷脂酰乙醇胺lysophosphatidyl ethanolamine)、溶血磷脂酰膽堿lysophosphatidyl choline)、磷脂酰肌醇phosphatidyl inositol)等,另購  特定層析液

          7. 用戶可以通過熒光強度分析脂類分子含量變化

          8. 用戶可以構建Rf層析移動圖像或曲線 

          9. 如果沒有合適的熒光成像儀器,可以另購  特定顯色液

          10. 染色完成后,即刻進行成像儀觀察

          11. 參考圖像如下:

           

           

          12. 本公司提供系列薄層色譜檢測試劑產品

           

          質量標準

           

          1. 本產品經鑒定性能穩定

          2. 本產品經鑒定熒光清晰


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